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Termociclador en tiempo real: ¿Cómo funciona?

Un termociclador en tiempo real es un equipo de biología molecular ampliamente utilizado en los laboratorios de esta especialidad. Estos dispositivos llevan a cabo la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR), es decir permiten llevar a cabo la PCR y al mismo tiempo pueden cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación. 

La PCR en tiempo real es una técnica para determinar cantidades del ADN o ARN en una gran variedad de ensayos que involucran la expresión de genes, la detección de patógenos y transgénicos, la genotipificación, la determinación de la carga viral, entre otros. Esta técnica cuenta con características importantes tales como una alta especificidad, amplio rango de detección y rapidez en la visualización del producto. 

¿Cómo funciona un termociclador de tiempo real?

Un termociclador de tiempo real, tiene la capacidad de hacer incidir sobre cada muestra un haz de luz especifico (a una longitud de onda determinada) y de detectar la fluorescencia emitida por un fluorocromo excitado. Este equipo puede calentar y enfriar rápidamente las muestras, permitiendo que se lleven a cabo los pasos de la reacción en cadena de la polimerasa, este proceso consiste en una serie de cambios de temperatura que se repiten de 25-40 veces.

Es decir, este equipo realiza de manera automática y cíclica cambios de temperatura requeridos para la amplificación de una cadena de ácido desoxirribonucleico (ADN); a partir de una enzima termoestable, y el uso de sustancias marcadas con un fluoróforo que permite medir la tasa de generación de uno o más productos específicos. 

Es por ello que un termociclador permite detectar y cuantificar de manera simultánea, las secuencias específicas de ácidos nucleicos por medio de moléculas fluorescentes presentes en la reacción, siendo el incremento de la fluorescencia directamente proporcional al incremento de la cantidad de moléculas de ADN amplificadas en la reacción.

¿Cómo está diseñado un termociclador de tiempo real?

Los termocicladores en tiempo real están diseñados para ofrecer temperatura estable, rendimiento óptico excepcional, precisión y exactitud. Estos dispositivos son usados ampliamente en diversos campos de la ciencia como la investigación científica, detección y diagnósticos clínicos, aplicaciones forenses y pruebas de aseguramiento de la calidad.

Estos equipos poseen un potente sistema óptico acoplado, que monitorea las señales de los fluoróforos usados para detectar el producto amplificado para monitorear el progreso de la reacción de amplificación, así como un hardware y un software para la captura y el análisis de los datos, respectivamente. El sistema fluorométrico del termociclador en tiempo real consiste en una fuente de energía para excitar a los fluoróforos (a una determinada longitud de onda de excitación) y un sistema de detección, que permita monitorear la señal emitida (a una longitud de onda de emisión). 

En el proceso de reacción la fluorescencia aumenta conforme el producto se amplifica, se combinan los procesos de amplificación y detección en una sola etapa. Actualmente existen diferentes tipos de termocicladores en tiempo real, cuyas diferencias principales son la fuente de energía, que utilizan para la excitación. Por lo general existen tres tipos de fuentes: las lámparas de luz, diodos de emisión de luz (LED) y láseres. 

¿Qué te ofrecemos en Kalstein?

En Kalstein somos fabricantes de equipos de laboratorio, innovadores y de la más alta calidad, por lo que ponemos a tu disposición el sistema de PCR en tiempo real YR01869-1 / 2, un equipo de sobremesa de alto rendimiento que te ofrece fiabilidad, sensibilidad y alta precisión al realizar tu PCR, este novedoso dispositivo cuenta con las siguientes características:

  • Diseño óptico innovador.
  • Sistema de detección fluorescente de dos y cinco canales con fuente de luz LED y CCD de alta resolución.
  • El sistema óptico recopila automáticamente datos de todos los pozos durante la adquisición de datos al mismo tiempo.
  • YR01869-1 / 2 puede discriminar hasta cinco objetivos en un solo pozo de reacción.
  • Los juegos de filtros ópticos están diseñados para maximizar la detección de fluorescencia para tintes específicos en canales específicos.
  • Sistema abierto compatible con diferentes reactivos y consumibles.

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